Questo tampone viene utilizzato per studiare il movimento del DNA
Questo buffer ha una bassa forza ionica e bassa capacità tampone. È più adatto all'elettroforesi di pezzi di DNA di grandi dimensioni (> 20 kb) e dovrà essere sostituito frequentemente o ricircolato per tempi di esecuzione del gel più lunghi (> 4 h).
Con questo in mente, potresti prendere in considerazione diversi lotti del buffer.
Dato che il buffer è facile da realizzare e che i passaggi possono essere eseguiti rapidamente, effettuare più di un lotto alla volta non dovrebbe essere particolarmente dispendioso in termini di tempo o di difficoltà. Utilizzando le istruzioni di seguito, dovrebbero essere necessari solo 30 minuti per creare il buffer TAE. Ecco come:
Preparare una soluzione madre di EDTA
Una soluzione di EDTA (acido etilendiamminotetraacetico) viene preparata in anticipo. L'EDTA non entrerà completamente in una soluzione finché il pH non sarà regolato a circa 8,0. Per una soluzione madre da 500 ml di 0,5 M EDTA, pesare 93,05 grammi di sale disodico EDTA (FW = 372,2). Sciogliere in acqua deionizzata 400-millilitri e regolare il pH con idrossido di sodio (NaOH). Ricarica la soluzione con un volume finale di 500 millilitri.
Montare una soluzione madre di TAE
Preparare una soluzione concentrata (50x) di TAE pesando 242 grammi di base di Tris (FW = 121,14) e sciogliendolo in circa 750 ml di acqua deionizzata.
Aggiungere con attenzione 57,1 millilitri di acido glaciale e 100 millilitri di 0,5 M EDTA (pH 8,0). Quindi, regolare la soluzione su un volume finale di 1 litro. Questa soluzione madre può essere conservata a temperatura ambiente. Il pH di questo tampone non è regolato e dovrebbe essere di circa 8,5.
Preparare una soluzione di lavoro di TAE
La soluzione di lavoro del buffer TAE 1x viene realizzata semplicemente diluendo la soluzione madre di 50 volte in acqua deionizzata.
Le concentrazioni di soluto finale sono 40 mM. Tris-acetato e 1 mM EDTA. Il buffer è ora pronto per l'uso nella gestione di un gel di agarosio.
Cosa ti serve per il buffer
Poiché la creazione del buffer TAE richiede solo un set di istruzioni rapido e semplice, il numero di materiali necessari non è eccessivo. Avrai solo bisogno di sale disodico EDTA, base di Tris e acido acetico glaciale.
La realizzazione del buffer richiede anche un pHmetro e gli standard di calibrazione, a seconda dei casi. Avrete anche bisogno di 600 millilitri e 1500 millilitri di becher o flaconi e di cilindri graduati. Infine, avrai bisogno di acqua deionizzata, agitare le barre e mescolare le piastre.
Avvolgendo
Dove pensi di realizzare il buffer: in un sito scolastico, in un cantiere di lavoro o in un altro luogo, come la tua casa? Controlla l'inventario prima di iniziare a verificare di disporre di tutti i materiali sopra indicati per il buffer TAE.
Se preferisci non dover pagare per i materiali, si consiglia di fare il buffer fuori casa. Puoi ordinare facilmente i materiali di cui hai bisogno online o visitare un negozio specializzato per loro.