Questo tampone viene utilizzato per la separazione elettroforetica del DNA
Il tampone TBE è particolarmente utile per la separazione di frammenti di DNA più piccoli (MW <1000), come piccoli prodotti di digestione di enzimi di restrizione .
TBE ha una capacità di buffering maggiore e offre una risoluzione più nitida rispetto al buffer TAE . Il tampone TAE è una soluzione composta da base Tris, acido acetico ed EDTA (Tris-acetato-EDTA).
La TBE è generalmente più costosa della TAE e inibisce la ligasi del DNA, che può causare problemi se si vogliono seguire le fasi successive di purificazione e legatura del DNA. Seguendo i tre semplici passaggi, scopri come creare un buffer TBE. Non dovrebbe richiedere più di 30 minuti per creare questo buffer. Ecco come:
Preparare una soluzione madre di EDTA
Una soluzione di EDTA (acido etilendiamminotetraacetico) deve essere preparata in anticipo. L'EDTA non andrà completamente in soluzione finché il pH non sarà regolato a circa 8,0. Per una soluzione madre da 500 ml di 0,5 M EDTA, pesare 93,05 grammi di sale disodico EDTA (FW = 372,2). Quindi scioglierlo in 400 millilitri di acqua deionizzata e regolare il pH con NaOH. Successivamente, rabboccare la soluzione fino a un volume finale di 500 millilitri.
Preparare una soluzione madre di TBE
Preparare una soluzione concentrata (5x) di TBE pesando 54 g di base di Tris (FW = 121,14) e 27,5 g di acido borico (FW = 61,83) e sciogliendo entrambi in circa 900 ml di acqua deionizzata. Quindi aggiungere 20 millilitri di 0,5 M EDTA (pH 8,0) e regolare la soluzione a un volume finale di 1 litro.
Questa soluzione può essere conservata a temperatura ambiente ma si formerà un precipitato in soluzioni più vecchie. Conservare il tampone in bottiglie di vetro e scartare se si è formato un precipitato.
Preparare una soluzione di lavoro di TBE
Per l'elettroforesi su gel di agarosio, è possibile utilizzare un tampone TBE a una concentrazione di 0,5x (diluizione 1:10 dello stock concentrato). Diluire la soluzione madre per 10 volte in acqua deionizzata. Le concentrazioni di soluto finale sono 45 mM Tris-borato e 1 mM EDTA. Il buffer è ora pronto per l'uso nella gestione di un gel di agarosio .
Quello che ti serve
Per creare un buffer TBE, sono necessarie solo quattro sostanze. I restanti articoli in questa lista sono attrezzature. Le quattro sostanze richieste sono sale disodico EDTA, base Tris, acido borico e acqua deionizzata.
Per quanto riguarda le attrezzature, avrete bisogno di un pH-metro e di standard di calibrazione, a seconda dei casi. In aggiunta a ciò, avrai bisogno di bacchette o flaconi da 600 millilitri e 1500 millilitri. A completare le vostre esigenze di attrezzature vi sono cilindri graduati, barre di agitazione e piastre di agitazione.
Controlla l'inventario presso il laboratorio che utilizzerai per assicurarti di avere tutto ciò che ti serve prima di iniziare. Niente è peggio che doverti fermare nel bel mezzo della preparazione di una soluzione perché hai esaurito i materiali adeguati.
Se il tuo laboratorio è a scuola o nel tuo posto di lavoro, controlla con il personale appropriato per vedere che hanno tutti gli articoli nel magazzino. Così facendo potresti risparmiare tempo ed energia alla fine.