Come congelare una coltura batterica (liofilizzazione)

La liofilizzazione, o liofilizzazione, è una breve procedura di laboratorio

La liofilizzazione, detta anche liofilizzazione o cryodesiccation, è il processo di rimozione dell'acqua da un prodotto dopo che è stato congelato (e quindi posto sotto vuoto) permettendo al ghiaccio di passare da un solido a un vapore, senza passare attraverso una fase liquida. Il ghiaccio (o altri solventi congelati) vengono rimossi da un prodotto attraverso il processo di sublimazione e le molecole d'acqua legate vengono rimosse attraverso il processo di desorbimento.

Le basi della liofilizzazione

Uno dei modi migliori per conservare una coltura batterica, fungina, di lievito o di altri microrganismi per lunghi periodi di tempo è utilizzare il processo di liofilizzazione. Questa breve procedura di laboratorio può essere eseguita con qualsiasi congelatore disponibile in commercio che preservi la tua collezione di colture. Poiché la liofilizzazione è la forma di essiccazione più complessa e costosa, il processo è solitamente limitato a materiali delicati e sensibili al calore di alto valore. Le sostanze che non sono danneggiate dal congelamento di solito possono essere liofilizzate in modo tale che lo stoccaggio refrigerato non sia necessario.

Questo processo può richiedere un minimo di tre ore e fino a 24 ore, escluso il tempo di crescita della cultura.

Il processo passo passo della liofilizzazione

1. In primo luogo, coltivare una coltura durante la notte, o un prato, del microrganismo su LB o altra piastra di agar nutriente appropriata.

2. Quindi, preparare le fiale con tappo a crimpare sterile in autoclave prima del tempo, con i tappi (tappi di gomma) posizionati liberamente sopra. Posizionare le etichette di carta stampate con l'identificazione della coltura all'interno dei tubi prima della sterilizzazione in autoclave. In alternativa, utilizzare tubi con tappi progettati per la sterilità .

1. Aggiungere 4 ml di tampone di liofilizzazione alla piastra. Se necessario, le cellule possono essere sospese usando un'asta di vetro sterile.

2. Trasferire rapidamente la sospensione di coltura nelle fiale sterilizzate. Aggiungere circa 1,5 ml per flacone. Sigillare con il cappuccio di gomma.

3. Congelare la sospensione di coltura all'interno dei flaconcini posizionando le fiale in un congelatore Celcius di -20 gradi.

1. Una volta che le colture sono congelate, preparare il liofilizzatore accendendolo e lasciando che le condizioni di temperatura e vuoto appropriate si stabilizzino. Fai questo seguendo le istruzioni del produttore per la marca particolare di liofilizzatore che stai utilizzando.

2. Con cautela e in modo asettico, posizionare i tappi dei flaconcini in modo lasco sopra le fiale, in modo che l'umidità possa fuoriuscire durante il processo di liofilizzazione e posizionare le fiale in una camera di liofilizzazione. Applicare il vuoto alla camera secondo le istruzioni del produttore.

3. Lasciare che il tempo di coltura si liofilizzi completamente (asciugare). Questo può richiedere da poche ore a una notte a seconda del volume di ciascun campione e di quanti campioni hai.

4. Rimuovere i campioni dalla camera del liofilizzatore secondo le istruzioni del produttore e sigillare immediatamente i flaconcini con i tappi di gomma, quindi i piani di crimpatura.

5. Conservare la raccolta di colture liofilizzate a temperatura ambiente.

Prodotti di cui avrai bisogno

• Liofilizzatore
• Nutrienti o altri piatti di agar appropriati (e incubatore per coltivare la cultura)
• Bacchetta di vetro
• Tampone di liofilizzazione
• Fiale a crimpare con tappi in gomma (e un piegatore per applicare i tappi)
• Congelatore

<sub>Riferimento:

SP Scientific. Principi di base dell'essiccamento per congelamento. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>