Definita anche Analisi RFLP, la tecnica sfrutta i polimorfismi nei codici genetici delle singole persone. Anche se tutti i membri di una specie hanno essenzialmente la stessa composizione genetica, queste lievi differenze spiegano le variazioni del fenotipo, come l'aspetto o il metabolismo, tra individui.
RFLP: tecnica di analisi e applicazioni
La tecnica di analisi RFLP consiste nel tagliare una particolare regione di DNA con variabilità nota, con enzimi di restrizione, quindi separare i frammenti di DNA mediante elettroforesi su gel di agarosio e determinare il numero di frammenti e le dimensioni relative.
Un enzima di restrizione è un enzima, una molecola proteica, che taglia il DNA nei siti di restrizione. In sostanza, il campione di DNA viene scomposto e digerito dagli enzimi di restrizione. I frammenti risultanti sono separati in base alla loro lunghezza e il modello delle dimensioni dei frammenti sarà diverso per ogni individuo testato.
Il processo RFLP completo richiede l'etichettatura della sonda, la frammentazione del DNA, l'elettroforesi, il blotting, l'ibridazione, il lavaggio e l'autoradiografia. L'RFLP rilevata viene visualizzata utilizzando una pellicola a raggi X in un'autoradiografia, in cui i frammenti di DNA possono essere visualizzati e analizzati dopo essere stati separati l'uno dall'altro mediante elettroforesi.
Alcune delle applicazioni per l'analisi RFLP includono:
- Fingerprinting del DNA . Gli scienziati forensi possono utilizzare l'analisi RFLP per identificare i sospetti sulla base di campioni di prove raccolte in scene di crimini.
- Paternità. La RFLP è anche usata nella determinazione della paternità o per tracciare l'ascendenza.
- Diversità genetica. La tecnica può essere utilizzata per studiare l'evoluzione e la migrazione della fauna selvatica, studiare i modelli di allevamento nelle popolazioni animali e nel rilevamento e diagnosi di alcune malattie.
La tecnica di utilizzo della rilevazione RFLP delle variazioni nei genomi è uno strumento vitale nella mappatura del genoma e nell'analisi delle malattie genetiche. Se la posizione di un particolare gene della malattia è ricercata in un determinato cromosoma, i ricercatori analizzeranno il DNA dei membri di una famiglia con la malattia, quindi cercheranno modelli di ereditarietà simili negli alleli RFLP.
Una volta localizzato un gene della malattia, condurre analisi RFLP su altri membri della famiglia potrebbe rivelare un portatore di geni mutanti o segnalare il rischio generale di malattia. È importante notare che la tecnica RFLP non è ampiamente utilizzata ora che vengono utilizzate tecniche più nuove e più robuste per l'analisi del DNA nelle scienze forensi e in molti altri campi.
Aspetto negativo dell'analisi
Sfortunatamente, la tecnica di analisi RFLP è noiosa e lenta. A prescindere dal richiedere una grande quantità di DNA campione - il campione di solito dovrebbe essere della dimensione di un quarto, che è relativamente grande per i campioni di DNA - il processo, dall'etichettatura della sonda al lavaggio e all'autoradiografia, può richiedere fino a intero mese per completare.
I risultati del progetto Human Genome hanno praticamente sostituito la necessità di RFLP. Il progetto ha permesso di determinare l'intera sequenza del DNA trovato nelle cellule umane, il genoma umano e per identificare tutti i geni nel genoma umano.